為什么要從化學發光轉換到熒光檢測

Western blot成像方法取決于二抗的標記物，常用的方法有基于酶促反應的化學發光法，基于熒光染料的可見熒光方法和紅外熒光方法，那么我們應該如何選擇呢？
*合適的Western blot實驗方法取決于您期望獲得哪些信息，也就是取決于您的實驗目的，小編比較了現有方法的優缺點，并分享了自己的心得，希望能夠幫助您選擇到*佳的實驗方法。

化學發光方法
化學發光western blot是相對容易且靈敏度*的檢測方法，靈敏度可以達到fg級。
適用于研究：通過電泳可輕松分離的分子量差異顯著的蛋白。

> 檢測單一蛋白
> 確定蛋白有無
> 檢測抗體反應
> 蛋白純度分析
> 檢測低豐度蛋白
 

 
熒光檢測方法
熒光染料分為可見熒光染料和紅外熒光染料，從而將熒光western blot檢測分為可見熒光檢測和紅外熒光檢測。目前可見熒光檢測*多三個通道，可以同時檢測三種不同的蛋白，近紅外檢測*多為兩個通道，一定選擇激光光源激發的哦，更接近近紅外染料的*大發射波長680nm和800nm，增強二抗信號，提高檢測的靈敏度。
熒光Western blot使用熒光染料標記的二抗進行檢測，膜上的靶標蛋白濃度與可見熒光信號強度呈線性關系，實現真實可靠的定量分析。熒光染料發射光譜不同，因此在一張印跡膜上可實現多重檢測。在無需剝離和重孵育條件下，進行上樣量質控，可以分析翻譯后修飾蛋白。
因此當您進行如下實驗室，選擇熒光檢測方法，妥妥的：

> 同時檢測多種蛋白
> 研究翻譯后修飾蛋白
> 同一印跡膜的上樣質控
> **定量western blot實驗
 

 
期刊雜志要求：
例如nature中“Image Integrity and Standards”中鼓勵在一張印跡膜上進行內參和目的蛋白的的檢測，同時使用合理的標準化方法：例如：全蛋白歸一化。


 
化學發光屬于酶促反應，動態范圍窄，只能實現定性分析，一次只能檢測一個信號，如要檢測多個信號，需要剝離和重孵育，如使用膠片成像，還需要反復摸索曝光時間，顯影定影設備和設備的維護，熒光檢測可同時滿足期刊雜志發表要求、一次可進行多個信號檢測，反應條件一致，jingzhun定量，特別近紅外熒光檢測方法，具有低背景，高信噪比，是現在western blot熒光定量的金標準。